• Edição 142
  • 05 de setembro de 2008

Teses

Caracterização de ceramida em Trypanosoma cruzi

Luana Freitas

Juliana Manasfi Figueiredo, do Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho (IBCCF) da UFRJ, defende sua tese de doutorado, na próxima terça-feira, dia 9, às 13h, na sala G1‑022. A tese aborda a “Caracterização Molecular e Funcional da Ceramida Sintase dependente de acil-CoA em Trypanosoma cruzi” e contou com a orientação dos professores Norton Heise e Turan Peter Urmenyi, ambos do IBCCF.

O estudo procurou caracterizar, molecular e funcionalmente, a enzima responsável pela síntese da ceramida em Trypanosoma cruzi. Dessa forma, a atividade de ceramida sintase foi detectada no sistema livre de células a partir do uso da base de cadeia longa 3H-diidroesfingosina e de acil-CoA como substratos aceptor e doador, respectivamente. Foi demonstrado, então, que a atividade desta ceramida é sensível ao substrato doador acil-CoA e ao inibidor específico Fumonisina B1. Além disso, a síntese foi proporcional à disponibilidade dos substratos no sistema reacional. Foram avaliados ainda os efeitos de Fumonisina B1 e de Australifungina, este último também inibidor específico da ceramida sintase em Trypanosoma cruzi.

Para identificar o gene potencial de ceramida sintase no genoma do parasito, a doutoranda realizou buscas no banco público de seqüências do Trypanosoma cruzi utilizando a seqüência em aminoácidos do domínio conservado lag1 da proteína LAG1 de leveduras. O gene, batizado TcCerS, foi caracterizado em termos de estrutura e expressão gênicas. Através de uma análise preliminar dos seus sítios de processamento, os resultados sugeriram a presença de, pelo menos, duas cópias do TcCers no genoma do Trypanosoma cruzi e duas espécies de RNA mensageiro com tamanhos de 1,8 e 3,0 kb nas três amostras testadas (cepa Y e clones CL-Brener e Dm28c). Realizou-se também o mapeamento do sítio aceptor de trans-splicing localizado 73 nucleotídeos a 5’ do início da região codificante, o que origina uma área 5’ não-traduzida (UTR) de 112 nucleotídeos no mRNA de TcCerS (clone Dm28c).

A caracterização funcional do gene TcCerS envolveu a complementação de leveduras mutantes que não apresentam atividade de ceramida sintase dependente de acil-CoA detectável. Portanto, como o gene foi capaz de complementar funcionalmente estas leveduras, os resultados permitiram concluir que o TcCerS codifica, de fato, uma ceramida sintase em Trypanosoma cruzi.

Calliandra Brevifolia em foco

Heryka Cilaberry

No próximo dia 17 de setembro, o mestrando do Núcleo de Pesquisa de Produtos Naturais (NPPN) da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ) Anthony de Paula Barbosa passará por uma grande experiência acadêmica: defender sua dissertação: “Uma saponina triterpenóide complexa de Calliandra brevifolia e seu efeito adjuvante contra o antígeno da ovalbumina”. A defesa acontece no auditório Paulo da Silva Lacaz, localizado no subsolo do bloco H do Centro de Ciências da Saúde (CCS) da UFRJ e está marcada para as 13h.

O mestrando, orientado pelos professores do Núcleo José Paz Parente e Bernadete Pereira da Silva, voltou-se para o estudo químico e farmacológico da espécie Calliandra brevifolia. O gênero Calliandra apresenta diversas espécies de plantas distribuídas por todo mundo. No Brasil, por exemplo, são muito conhecidas pelas suas belíssimas flores que formam cachos e, por isso, muito utilizados para ornamentação e também para a produção de bonsai. Normalmente é conhecida como “esponjinha”, ou “quebra-foice”, devido à resistência de sua madeira, muito usada para a fabricação de bengalas.

Segundo Antony, apesar de muito abundantes em nosso planeta, há poucos relatos de estudos de espécies desse gênero. Porém a avaliação da atividade de extratos de Calliandra tweedii e Calliandra anomala por pesquisadores japoneses e profundas pesquisas de Calliandra pulcherrima pelo seu grupo de estudos os impulsionou a investigar química e farmacologicamente a espécie Calliandra brevifolia.

De acordo com essas pesquisas já então realizadas, os extratos de C. tweedii diminuem os níveis de inflamação e de gordura e ajudam na cura de úlceras e extratos de C. anomala são usados no México como agente anti-malarial e antiviral. Em 2004, o grupo de estudos identificou e elucidou uma saponina (heterosídeo do metabolismo secundário vegetal com propriedades detergentes e surfactantes) triterpenoidal de C. pulcherrima com potencial atividade adjuvante contra o antígeno da Leishmania donovani, agente patogênico que causa a leishmaniose.

Agora, na presente pesquisa, realizou-se a extração, isolamento, purificação e elucidação estrutural da saponina de C. brevifolia, com posterior avaliação de seu efeito adjuvante contra o antígeno da ovalbumina, albumina obtida da clara de ovos, isto é, havendo a verificação da capacidade de que essa substância isolada tem de promover uma potencialização da resposta imune quando em contato com o antígeno (ovalbumina).

Deste modo, após diversas reações químicas e técnicas elucidativas, o grupo de estudos se preocupou em verificar a atividade biológica imunoadjuvante da substância isolada, brevifoliasaponina. Para tal, foi utilizada como padrão de comparação a saponina de Quillaja saponaria, conhecida como QS-21. Segundo Antony, foi a primeira saponina isolada com atividade adjuvante e a única presente em algumas formulações de vacinas comercialmente vendidas.

Foram realizadas também comparações sobre a capacidade de promover uma potencialização da reposta celular através de ensaios in vivo utilizando como adjuvante tanto a QS-21 como também a brevifoliasaponina, além de outros adjuvantes não-saponinícos. Na pesquisa, também foi verificada comparativamente a capacidade desses adjuvantes de promover hemólise (quebra de hemácias).